Thứ tư dụng của thuốc thử nhuộm màu trong nhuộm Gram là gì
Nhuộm Gram là một phương pháp nhuộm do Gram sáng chế năm 1884. Phương pháp này giúp phân biệt vi khuẩn bắt màu Gram (Gram dương) và vi khuẩn không bắt màu Gram (Gram âm), từ đó giúp cho việc chẩn đoán xác định loại vi khuẩn. Show Chuẩn bị thuốc thử
Kỹ thuật nhuộm Gram(1). Dàn bệnh phẩm hoặc vi khuẩn lên trên lam kính sạch. (2). Cố định bằng cách hơ qua trên ngọn lửa đèn cồn. Để nguội. (3). Nhuộm:
(4). Để khô tự nhiên. (5). Soi dưới vật kính dầu. Nguyên tắc nhuộmNhuộm tím Gentian: Nhuộm tất cả vi khuẩn thành màu tím đen. Nhỏ Lugol: Gắn màu tím vào vi khuẩn đậm hay nhạt tuỳ loại. Tẩy cồn 950: Tẩy màu một số vi khuẩn mà dung dịch lugol không gắn chắc màu tím vào được. Không tẩy màu một số vi khuẩn mà màu tím đã được dung dịch lugol gắn chắc vào. Bước tẩy cồn rất quan trọng nên phải thật chú ý trong quá trình nhuộm. Nhuộm đỏ Fuchsin: Nhuộm đỏ trở lại những vi khuẩn đã bị cồn tẩy màu. Không có tác dụng trên vi khuẩn đã bị nhuộm tím đen. Cơ chế bắt màu GramCó sự khác biệt giữa vi khuẩn Gram (+) và vi khuẩn Gram (-) về cấu tạo của lớp peptidoglycan (murein) ở thành tế bào vi khuẩn. Các vi khuẩn Gram (+) có lớp peptidoglycan dày hơn làm cho vi khuẩn giữ chắc màu tím gentian và không bị tẩy màu bởi cồn. Sau khi nhuộm fuchsin, vi khuẩn không bắt màu đỏ mà vẫn giữ nguyên màu tím, đó là vi khuẩn Gram (+). Các vi khuẩn Gram (-) có lớp peptidoglycan mỏng hơn làm cho vi khuẩn không giữ được màu tím gentian và bị tẩy màu bởi cồn trở thành không màu. Khi nhuộm fuchsin vi khuẩn bắt màu đỏ, đó là vi khuẩn Gram (-). Đọc kết quả nhuộm GramVi khuẩn Gram (+) bắt màu tím sẫm Gentian: Tụ cầu, liên cầu, phế cầu, trực khuẩn khuẩn bạch hầu, trực khuẩn than. Vi khuẩn Gram (-) không bắt màu tím Gentian nên có màu đỏ Fucshin: Lậu cầu, não mô cầu, E. coli, Shigella, Salmonella, tả. Lưu ý về nguyên nhân nhuộm saiGram dương giả
Gram âm giả
Bệnh viện Bạch Mai
Nhuộm Gram là một trong những kỹ thuật nhuộm quan trọng nhất trong vi sinh vật học. Nó được đặt tên từ nhà vi khuẩn học người Đan Mạch Hans Christian Gram, người lần đầu tiên giới thiệu nó vào năm 1882, chủ yếu để xác định các sinh vật gây ra bệnh viêm phổi. Khi thử nghiệm đầu tiên được thực hiện, phương pháp nhuộm gram vi khuẩn bao gồm việc sử dụng tinh thể tím hoặc xanh methylen làm màu chính. Thuật ngữ chỉ các sinh vật giữ được màu cơ bản và xuất hiện màu nâu tím dưới kính hiển vi là sinh vật Gram dương. Các sinh vật không bắt màu sơ cấp có màu đỏ dưới kính hiển vi và là các sinh vật Gram âm. Để hiểu rõ hơn về phương pháp này, hãy cùng Docosan tìm hiểu thêm trong nội dung dưới đây. Tổng quan về phương pháp nhuộm GramBước đầu tiên trong quá trình nhuộm Gram là sử dụng thuốc nhuộm tím pha lê để nhuộm ban đầu cho phiến kính. Bước tiếp theo, còn được gọi là cố định thuốc nhuộm, bao gồm việc sử dụng i-ốt để tạo thành phức hợp i-ốt màu tím tinh thể để ngăn cản việc loại bỏ thuốc nhuộm một cách dễ dàng. Sau đó, một chất khử màu, thường là dung môi của etanol và axeton được sử dụng để loại bỏ màu nhuộm. Nguyên tắc cơ bản của nhuộm Gram liên quan đến khả năng của thành tế bào vi khuẩn để giữ lại thuốc nhuộm tím tinh thể trong quá trình xử lý bằng dung môi. Vi sinh vật gram dương có hàm lượng peptidoglycan cao hơn, trong khi vi sinh vật gram âm có hàm lượng lipid cao hơn. Ban đầu, tất cả các vi khuẩn sử dụng thuốc nhuộm màu tím pha lê tuy nhiên, với việc sử dụng dung môi, lớp lipid từ các sinh vật gram âm bị hòa tan. Với sự hòa tan của lớp lipid, gram âm làm mất vết sơ cấp. Ngược lại, dung môi làm mất nước của thành tế bào gram dương với việc đóng các lỗ chân lông ngăn cản sự khuếch tán của phức hợp iốt tím và do đó, vi khuẩn vẫn bị nhuộm màu. Thời gian khử màu là một bước quan trọng trong quá trình nhuộm gram vì tiếp xúc lâu với chất khử màu có thể loại bỏ tất cả các vết bẩn khỏi cả hai loại vi khuẩn. Bước cuối cùng trong quá trình nhuộm gram là sử dụng chất nhuộm màu fuchsin cơ bản để tạo cho vi khuẩn gram âm đã khử màu có màu hồng để dễ nhận biết hơn. Nó còn được gọi là phản lưới. Một số phòng thí nghiệm sử dụng safranin như một chất phản công tuy nhiên, fuchsin cơ bản nhuộm các sinh vật gram âm mạnh hơn safranin. Tương tự, ứng dụng Haemophilus spp., Legionella và một số vi khuẩn kỵ khí bắt màu kém với safranin. Quy trình nhuộm GramKhi nào cần chỉ định nhuộm GramNhuộm Gram được chỉ định bất cứ khi nào nghi ngờ nhiễm vi khuẩn để chẩn đoán sớm và dễ dàng. Mẫu vậtNhiều bệnh phẩm lâm sàng khác nhau có thể được sử dụng để thực hiện nhuộm Gram. Một số bệnh phẩm thường được sử dụng là đờm, máu, dịch não tuỷ, dịch cổ trướng, dịch khớp, dịch màng phổi, nước tiểu,… Cũng có thể dùng tăm bông ngoáy mũi, họng, trực tràng, vết thương, cổ tử cung. Việc lấy bệnh phẩm phải luôn được đựng trong các vật chứa vô trùng. Các bước nhuộm GramCác loại thiết bị cần thiết để nhuộm Gram
Thuốc thử cần thiết để nhuộm Gram
Thực hiệnChuẩn bị phết tế bào
Nhuộm Gram
Kiểm tra slide bằng kính hiển vi
Các phương pháp nhuộm Gram khác nhau được sử dụng, chẳng hạn như nhuộm Gram Atkin, và nhuộm Gram Burke, v.v. Chẩn đoán kết quảNhuộm Gram là phương pháp giúp hỗ trợ chẩn đoán bệnh hoặc tình trạng bệnh lý. Ví dụ về các sinh vật gram dương là:
Ví dụ về các sinh vật gram âm là:
Ví dụ về các sinh vật biến đổi gram bao gồm: Một kết quả bình thường trong dịch cơ thể vô trùng phải là không có bất kỳ sinh vật bệnh lý nào trong vết phết. Các sinh vật được xác định dựa trên màu sắc và hình dạng.
Các phát hiện trên vết nhiễm khuẩn Gram gợi ý các bệnh nhiễm trùng cơ bản:
Nhuộm Gram thường là xét nghiệm chẩn đoán ban đầu để đánh giá tình trạng nhiễm trùng. Việc sử dụng phương pháp nhuộm Gram tạo điều kiện nhanh chóng cho việc sử dụng kháng sinh thích hợp. Tuy nhiên, trình tự gen và kỹ thuật phân tử đặc hiệu hơn so với nhuộm gram cổ điển. Bài viết được tham khảo từ bác sĩ và các nguồn tư liệu đáng tin cậy trong và ngoài nước. Tuy nhiên, Docosan Team khuyến khích bệnh nhân hãy tìm và đặt lịch hẹn với bác sĩ có chuyên môn để điều trị. Để được tư vấn trực tiếp, bạn đọc vui lòng liên hệ hotline 1900 638 082 hoặc CHAT để được hướng dẫn đặt hẹn. Nguồn tham khảo: ncbi |